Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型白血病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次不止现去甲自身病原纤到不止现1型号肝炎诊疗症状的实质性数万人在幼儿时期就有很好的阐述，多个去甲自身病原纤HIV的幼儿当中有70%在毒素转换后10将近患上肝炎，而随访15年的幼儿这一比数万人缩减到84%。比起之下，九成诊疗1型号肝炎一半以上的型号1型号肝炎的患病机制还没有得到充分的数据分析。

越来越多的人开始采用分阶段系统来定义1型号肝炎的实质性：个纤在不止现多种去甲自身病原纤时进到第1下一阶段，不止现血糖异常时进到第2下一阶段，不止现症状时进到第3下一阶段。一些多发去甲自身病原纤HIV的个纤，在1期和2期，实质性极快，并发展为患病的1型号肝炎。我们在此之后阐述了一一组在首次检测到多种去甲自身病原纤样本后至少10年无肝炎的极慢实质性者，这一组病人人数少，但形态非常明确。随后，我们挖掘出去甲自身抗体特异性CD8+T细胞会反应当在实质性比极快的病人当中基本不存在，但在近期患病和长期存在的肝炎病人当中很容易检测到。这可能表明，与实质性病人比起，这些病人自身免疫反应当的平衡增强。

早期数据分析表明，尽管平衡性T细胞会(Treg)数量正常，但肝炎病人存在一些特性缺陷，其当中包括对IL-2的反应当能力减缓。此外，肝炎病人当中的不稳定性当CD4+T细胞会可能对平衡更为重要抵抗性，表现为不稳定性当T细胞会的抑制作用消散，自然现象产生的Treg和纤外产生的诱导Treg，以及抗体经历的CD4+T细胞会当中IL-2反应当消散。本数据分析的借此是阐述了CD4+平衡性T细胞会(Treg)在一个大极比极快实质性者当中的形态，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

分析方法：BOX数据分析是一项以这群人为基础的纵向数据分析，在21岁以下确诊的病人亲属当中检查1型号肝炎的脆弱因素。我们在此之后阐述了长期比极快实质性者的形态，他们保持多重去甲自身病原纤HIV最少10年，但没有不止现肝炎的诊疗症状，慢性或非来受累自身免疫。随后，10名继续保持无肝炎并愿意透过大量血液样本的比极快实质性者扩及T和B细胞会特性比对。在目前的数据分析当中，8名慢实质性者(SP一组)，当中位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁错综复杂的去甲自身病原纤HIV。所有的参与者都处于1型号肝炎实质性的1期，尽管一些人随后丧失了去甲自身病原纤对某些抗体的HIV反应当，然而，一名病人已经处于2期至少6年，但没有不止现诊疗症状，一名病人被诊断为肝炎，该受试者72岁，在挖掘实验样本时，其HbA1c急剧下降到53 mmol/mol(7%)，在建模当中对该供纤来进行了单独审核。分离外周血单个核细胞会(PBMCs)，采用多参数流式细胞会法术和T细胞会抑制作用检验审核供纤当中Treg的Hz、环境因素号和特性。采用FlowSOM和CITRUS(聚类解剖、表征和回归)来进行无指导聚类比对，审核Treg环境因素号。

结果：与心理健康供纤比起，来自慢实质性纤的思绪CD4+T细胞会的指导聚类表明，抑制的思绪CD4+ TregHz缩减，与抗生素诱导的TNFR相关蛋白(GITR)表示缩减有关。一名HbA1c急剧下降的病人与实质性比极快者和冗余的对照一组比起，Treg谱有所相同。特性推断，与心理健康供纤比起，来自比极快实质性纤的Treg抑制的CD4+不稳定性当T细胞会抑制作用明显受损。表现为对不稳定性当CD4+T细胞会CD25和CD134表示的抑制作用缩减。

左图1 深入的环境因素号比对表明，CD4+Treg亚型号在慢实质性队列当中缩减。由FlowSOM生成的Treg室，有数在来自所有供纤的活CD4+CD45RA -细胞会上。根据标识物表示解剖不止10个元簇:思绪T细胞会_1;思绪T cell_2;思绪T cell_3;思绪T cell_4;CD49b思绪T细胞会;HLA-DR + GITR +思绪T细胞会;磁盘Treg_1;磁盘Treg_2;磁盘Treg_3;和磁盘Treg_4。(a)采用9个相同Treg标识生成的10个元簇的MST。每个终端代表一个集群(100个集群)，更大的元集群(10个元集群)在终端一组周围上色。每个终端当中的碗左图问到单个标识的表示分级。(b)每个元聚类的热左图，以表明整纤标识表示。(c, d)为HD一组(c)和SP一组(d)生成左图，以及FlowSOM辨别的每个元簇的覆盖层。(e-l)一般来说同位素为每个metacluster罐曲支线左图(同位素> 0.05%)确定为HD和SP一组:磁盘Treg_2 (e),磁盘Treg_3 (f),磁盘Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +思绪T细胞会(h)、思绪T cell_1(i),思绪T cell_2 (j),思绪T cell_3 (k) n d CD49b思绪T细胞会(l)。浅蓝色圆点代表这些年来SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验。此键适用于左图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

左图2 采用CITRUS的预测模型号证实，TregHz的缩减是实质性比极快的标志。分级门控(a - f)和柑橘比对(g-k)比较SP参与者和冗余的HD参与者在CD4+CD45RA−T细胞会上的相似之处。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群纤的代表性左图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR表示来进行分离，模拟FlowSOM群纤。(b) HD(黑点)和SP(黑纹)一组以及供纤SP 606(浅蓝色)当中CD25+ cd127的Hz核心内容左图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控子集的罐曲支线左图;(c) HLA-DRloGITR−(磁盘Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(磁盘Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(磁盘Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+磁盘T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3表示强度着色，箭头突不止的簇被辨别为SP和HD队列错综复杂的相同。(j)罐曲支线左图表明了在SP(黑纹)和HD(灰点)一组当中，CITRUS思绪Treg_3和Treg_4的一般来说同位素(比数万人)。(k)直方左图表明每个簇的环境因素号(粉红色)和Treg标识一般来说表示与背景表示(紫色);上列，磁盘Treg_3;下面一行，磁盘Treg_4。背景与所有其他簇当中标识的表示有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验

左图3 与心理健康献血者比起，实质性比极快者思绪treg的GITR缩减。每个思绪CD4+T细胞会元簇(思绪T细胞会_1;思绪T cell_2;思绪T cell_3;CD49b +思绪T细胞会;HLA-DR + GITR +思绪T细胞会;磁盘Treg_2;磁盘Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检测每个表示标识的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)队列的表示热左图(sp606不包括在内)。(c,d)思绪Treg_4元簇当中所有HD(红色)、所有SP(紫色)和SP 606(浅蓝色)的FlowSOM GITR表示联结，表明直方左图(c)和核心内容左图(d)。Wilcoxon配对符号秩和检验，p< 0.07(浅蓝色)所有供纤包括，p< 0.05(紫色)供纤SP 606和冗余的HD不包括在测试当中。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs当中GITR表示，从分级门控，从所有HD(红色)、所有SP(紫色)和SP 606(浅蓝色)联结，表明直方左图(e)和核心内容左图(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩检验

左图4 来自比极快实质性的CD4+ treg细胞会控制不稳定性当CD4+T细胞会的能力减缓。SP一组用紫色的支线和圆点问到，HD一组用红色的支线和圆点问到，浅蓝色的支线/圆点问到供纤sp606。采用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞会来进行分选。CD4+CD25−(应当答者)被标识为CFSE, Treg按观察的比数万人反应物。用抗CD3 /28微珠增殖细胞会，培训3过后来进行流式细胞会法术检测。(a-d)与CD4+应当答者一般来说应当的treg培训(自纤)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD应当答者培训。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE抑制作用倍数(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的抑制作用倍数。采用HIV对照(抑制的响应当细胞会不含treg)计数抑制作用倍数。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差比对。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

左图5 不稳定性当CD4+T细胞会对比极快实质性的T细胞会增殖的抑制作用更敏感。SP一组用紫色的支线和圆点问到，HD一组用红色的支线和圆点问到，浅蓝色的支线/圆点问到供纤sp606。采用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞会来进行分选。CD4+CD25−(应当答者)被cfsel标识，treg按观察的比数万人反应物。用抗CD3 /28微珠增殖细胞会，培训3过后来进行流式细胞会法术(CD25反染)和细胞会因子比对。HD Treg与HD、SP或sp606应当答者主导培训。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE抑制作用花红(b)。(c,d) CD25抑制作用花红(c)和CD134抑制作用花红(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培训当中的表示。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差比对。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

结论：我们得不止的结论是，来自比极快实质性子的增殖思绪CD4+Treg在GITR表示当中得到了扩张和丰富，强调了进一步数据分析Treg在1型号肝炎风险个纤当中的异质性的必要性。

文中不止处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28